Методическая разработка по подготовке лабораторного занятия №41 для студентов медицинского факультета Тема: Патогенные энтеробактерии.

Вид материала

Методическая разработка

Содержание развернутая РА Райта (диагностический титр 1:100 и выше) Аллергическая проба (проба Бюрне) Бактериоскопический метод (предварительная диагностика) мазки по Грамму, мазки по Романовському-Гимзе. Биологический метод Методы для ретроспективной диагностики или определения поствакцинального иммунитета РСК, РНГА, ИФА , реакция коагглютинации с сибиреязвенным антигеном Организационная структура проведения лабораторного занятия.

Подобный материал:

• План занятия: 10 00 Проверка готовности студентов к занятию (тестовый контроль, устный, 259.7kb.
• План занятия: 10 00 Проверка готовности студентов к занятию (тестовый контроль, устный, 128.17kb.
• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №11 для студентов, 777.95kb.
• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №31 для студентов, 622.65kb.
• Календарный план лекций по микробиологии, вирусологии и иммунологии для студентов, 23.61kb.
• Методическая разработка для преподавателей. Тема: (для студентов курса факультета), 103.03kb.
• Методическая разработка по подготовке и работе на лабораторном занятии №21 для студентов, 595.87kb.
• Методическая разработка для проведения практического занятия со слушателями тема 16., 432.07kb.
• Методическая разработка по хирургии для студентов IV курса медицинского факультета, 42.2kb.
• Календарный план лекций по микробиологии для студентов 2 курса медицинского факультета, 12.99kb.

- развернутая РА Райта (диагностический титр 1:100 и выше)

- непрямая реакция иммунофлюоресценции

- реакция Кумбса (определение неполных антител)

- опсоно-фагоцитарная реакция

- ИФА, РНГА, РСК

Аллергическая проба (проба Бюрне) внутрикожное введение бруцеллина. Положительная с 15-20 дня заболевания.

Схема микробиологической диагностики сибирской язвы

Материал для исследования зависит от формы инфекции: содержимое карбункула, везикул (кожная форма); мокрота (легочная форма); испражнения (кишечная форма); кровь (септическая форма).

Бактериоскопический метод (предварительная диагностика)

1. мазки по Грамму,

2. мазки по Романовському-Гимзе.

3. РИФ.

Бактериологический метод (окончательная диагностика)

5. посев материала на МПА, кровяной агар, в МПБ;
   
6. через 18-20 ч. подозрительные колонии пересевают на скошенный агар;
   
7. идентификацию чистой культуры проводят на основании результатов :
   
   1. биологической пробы (заражение белых мышей, определение в мазках-отпечатках капсулированных бацилл)
      
   2. теста «жемчужного ожерелья» (высев в среду с пенициллином, где возбудитель сибирской язвы образует L-формы);
      
   3. фаголизабельность сибиреязвенным бактериофагом;
      
   4. способности образовывать капсулу на средах с добавлением природного белка (сывороточный агар)
      
   5. отсутствия гемолитической активности;
      
   6. отсутствия подвижности
      

Дифференционные признаки бацилл

Признак или тест	B.anthracis	B.anthracoides	B.subtilis	B.megaterium	B.cereus
Капсула	+	-	-	-	-
Патогенность для белых мышей	+	-	-	-	-
Лизис специфическим фагом	+	-	-	-	-
Тест «жемчужного ожерелья»	+	-	-	-	-
РИФ с антисибиреязвенной сывороткой	+	-	-	-	-
Подвижность	-	+	+	+	+
Гемолиз	-	+	+	-	-
лецитиназа	-	+	+	+	+
Фосфатаза	-	+	+	+	+

Биологический метод – материалом от больного подкожно заражают белых мышей; животные гибнут через 1-2 дня после введения материала; во внутренних органах обнаруживают возбудители с типичной морфологией

Методы для ретроспективной диагностики или определения поствакцинального иммунитета:

Аллергический метод – постановка внутрикожной пробы с антраксином

Серологический метод:

Материал для исследования: сыворотка крови

РСК, РНГА, ИФА , реакция коагглютинации с сибиреязвенным антигеном

Методы для определения антигенов сибиреязвенных бацилл в материале, животноводческом сырье, и т.п..

Серологическая диагностика: Реакция термокольцепреципитации по Асколи


1.7. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.

1.7.1. Методика проведения занятия.

9. Изучить морфологию патогенных бруцелл в демонстрационных препаратах, окрашенных по Грамму. Микроскопическую картину зарисовать в протокол.
   
10. Изучить морфологию возбудителя сибирской язвы в демонстрационных препаратах, окрашенных по Грамму, Цилю-Нильсену, Бурри-Гинсу. Микроскопическую картину зарисовать.
    
11. Провести визуальное и стереомикроскопическое исследование R-форм колоний антракоидов на кровяном агаре.
    
12. Поставить реакцию кольцепреципитации по типу Асколи , учесть результаты, внести в протокол сведения о цели применения реакции.
    
13. Оценить результаты демонстрационной ориентировочной пластинчатой реакции Хеддельсона, схему реакции и результаты внести в протокол (см. рисунок).
    
14. Учесть результаты демонстрационной реакции Райта, поставленной с целью подтверждения диагноза «бруцеллез». Данные внести в протокол, сделать выводы.
    
15. Ознакомиться с препаратами, которые используют для диагностики, лечения и профилактики бруцеллеза и сибирской язвы. Данные внести в протокол.
    
16. Оформить протокол, сделать выводы.
    

Схема пластинчатой реакции Хеддельсона

0,08 мл исследуемой сыворотки 0,03 мл бруцеллезного диагностикума Результат:	0,04 мл исследуемой сыворотки 0,03 мл бруцеллезного диагностикума Результат:	0,02 мл исследуемой сыворотки 0,03 мл бруцеллезного диагностикума Результат:
0,01 мл исследуемой сыворотки 0,03 мл бруцеллезного диагностикума Результат:	Контроль сыворотки: 0,02 мл исследуемой сыворотки 0,03 мл физиологического раствора Результат:	Контроль диагностикума: 0,03 мл бруцеллезного диагностикума 0,03 мл физиологического раствора Результат:

2. Организационная структура проведения лабораторного занятия.
   

№ этапа	Этапы работы	Время мин..	Средства обучения	Оборудование	Место проведения
1.	Организационная часть	2	-	-	У Ч Е Б Н А Я К О М Н А Т А
2.	Проверка исходного уровня знаний: Устно по вопросам Письменно - по тестам	5 10	Источники учебной информации Тесты на исходный уровень знаний-умений	-
3.	Инструктаж преподавателя по выполнению практической работы согласно методическим указаниям	3	Методическая разработка	-
4.	Самостоятельная работа студентов: микроскопирование мазков-препаратов патогенных бацилл и бруцелл, занесение сведений в протокол; изучение стерео микроскопически R-форм колоний бацилл; постановка реакции кольцепреципитации по Асколи; учет результатов демонстрации реакции Хеддельсона, внесение в протокол схемы реакции, данных об оценивании результата; учет результатов демонстрационной РА Райта с сывороткой больного, внесение данных в протокол; ознакомление с биопрепаратами, которые используют для лабораторной диагностики, профилактики и лечения сибирской язвы и бруцеллеза, внесение сведений в протокол оформление выводов к лабораторному занятию	15 7 7 10 6 7 3	Таблицы «Лабораторная диагностика сибирской язвы», «Лабораторная диагностика бруцеллеза», алгоритмы исследования	Мазки бруцелл, окрашенные по Грамму; Мазки бацилл, окрашенные по Грамму, Цилю-Нильсену, Бурри-Гинсу; Микроскоп; Среды: кровяной МПА, засеянный антракоидами; Стереомикроскоп Преципитационные пробирки; Преципитиноген; Пипетки Бруцеллезный диагностикум; Исследуемая сыворотка; Физиологический раствор; Набор микропипеток; Пластина для постановки реакции Хеддельсона Штатив с демонстрационной РА Райта Набор препаратов: диагностические сыворотки, люминесцентная специфическая сыворотка; вакцина СТИ, бруцеллин, бактериофаги, антибиотики
5.	Оценка деятельности каждого студента и проверка усвоения темы: письменно - по системе обучающих задач;	12	Система обучающих задач
6.	Подведение итогов занятия, задание для самостоятельной работы студентов при подготовке к следующей теме	3