Окислительный стресс и дисфункция эндотелия у пациентов с ревматической болезнью сердца с хронической сердечной недостаточностью 14. 00. 39 ревматология

Вид материала

Статистическая обработка полученных данных
Результаты исследования и их обсуждение
Таблица 2 Сравнение показателей кислородзависимого метаболизма нейтрофилов с контролем.
Таблица 3 Сравнение показателей КЗМ нейтрофилов у пациентов, страдающих митральными пороками сердца
Таблица 4 Сравнение показателей КЗМ нейтрофилов у пациентов с аортальными пороками сердца
Таблица 6 Сравнение показателей функционального статуса нейтрофилов у больных РБС различных возрастных групп
Пациенты с РБС+АГ(n=46)

Подобный материал:

1 2 3

Статистическая обработка полученных данных

Статистическая обработка данных проводилась при помощи пакета прикладных программ STATISTICA 6.0 (StatSoft Inc., США). Осуществлялась проверка нормальности распределения количественных признаков с использованием критериев Колмогорова-Смирнова с поправкой Лиллиефорса и Шапиро-Уилка; проверка равенства генеральных дисперсий с помощью критериев Фишера, Кокрана, и однородности распределения на основании анализа таблиц сопряженности.

Для количественных нормально распределенных признаков производилось вычисление среднего значения, среднеквадратического отклонения и ошибки средней. Величина ошибки средней в статистический отчет не включалась. Данные представлялись в виде: M±s, где М - среднее, s - стандартное (среднеквадратическое) отклонение. Указывался объем анализируемой подгруппы (n).

При однофакторном анализе для непрерывных величин применялся парный t-тест Стьюдента, для дискретных – χ² с поправкой Йетса. Взаимосвязь двух признаков при наличии нормального распределения оценивалась по результатам корреляционного анализа по Пирсону.

Для одновременного исследования трех и более признаков использовался регрессионный, дискриминантный, факторный и кластерный анализ.

Во избежание некорректного включения в многофакторный анализ переменных, которые имели распределение, отличное от нормального, и по которым изучаемые группы различались, непрерывные переменные делились на квартили, и их сравнение проводилось с использованием метода χ².

В пошаговый дискриминантный анализ Уилкса включались те переменные, при сравнении которых по группам значение p (статистическая значимость) не превышало 0,2.

Для количественных признаков, имеющих распределение, отличное от нормального, а также категориальных - номинальных или порядковых - производилось вычисление медиан и интерквантильных интервалов. Интерквантильный размах указывался в виде 25 и 75 процентилей: верхней границы 1-го и нижней границы 4-го квартилей. Приводимые данные имели следующее представление: Me (25%; 75%). Большинство исследованных признаков имело распределение, отличное от нормального.

Для сравнения двух независимых групп по одному признаку применяли критерии Манна-Уитни, χ², точный критерий Фишера; зависимые группы сравнивались с использованием критериев Вилкоксона, МакНамара и критерия знаков. Для однофакторного сравнения трех и более независимых групп использовались метод ANOVA (analysis of variances) по Краскелу-Уоллису, медианный критерий и критерий χ². Непараметрический дисперсионный анализ трех и более зависимых групп осуществлялся с применением ANOVA Фридмана.

Для изучения взаимосвязи двух признаков использовался корреляционный анализ по Спирмену. Исследование вида зависимости признака от одного или нескольких других признаков проводилось на основании линейного регрессионного и логистического регрессионного анализа.

Качественные данные обобщались путем подсчета количества наблюдений каждой категории, вычисления доли наблюдений конкретной категории в исследуемой выборке и выражались в процентах (n (%)). Критическое значение уровня статистической значимости принималось равным 5% (В.П. Боровиков, 2003).

Результаты исследования и их обсуждение

Были проанализированы показатели кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у больных с хронической ревматической болезнью сердца, по сравнению с группой контроля (Таблица 2).

Таблица 2

Сравнение показателей кислородзависимого метаболизма нейтрофилов с контролем.

Показатель	Контроль (n=25)	РБС (n=81)	р
сХЛлл, 10⁴, имп/мин	1,0 (0,5;1,8)	1,4 (0,7; 4,0)	0,04
аХЛлл, 10⁴, имп/мин	1,1 (0,25; 2,75)	1,75 (1,1; 5,1)	0,02
сХЛлн, 10⁴, имп/мин	0,7 (0,35; 1,3)	1,0 (0,65; 2,05)	0,02

В приведенной таблице приведены показатели резервных возможностей нейтрофилов и общей метаболической активности нейтрофилов, которые у пациентов с РБС были повышены, по сравнению с контролем.

Полученные результаты можно интерпретировать следующим образом: показатели резервных метаболических возможностей нейтрофилов у пациентов с ревматической болезнью сердца оказались выше на 59%, чем в контроле, по данным аХЛлл.

Показатели метаболического резерва нейтрофилов являются одними из наиболее важных показателей их функции, к тому же показатели общей метаболической активности у этой когорты пациентов были повышены на 40% по данным сХЛлл, что свидетельствует о напряжении неспецифической защиты организма, а продукция супероксидного аниона была экспрессирована на 30%. Возможным итогом этих преобразований является достижение сегментоядерными нейтрофилами состояния прайминга, сопровождающегося активацией свободнорадикальных реакций, связанных с образованием активных форм кислорода и оказывающих цитотоксическое действие посредством инициации процессов перекисного окисления липидов клеточных мембран (В.S. Ocmar, et al. 1998).

Анализ аналогичных показателей у пациентов со стенозом левого АВ-отверстия и недостаточностью митрального клапана, по сравнению с группой контроля (Таблица 3) показал, что показатели резерва метаболической активности нейтрофилов вдвое повышены у пациентов с митральным пороком сердца с преобладанием стеноза митрального отверстия, по сравнению с контролем (p < 0,05), по данным аХЛлл, в то время, как показатели резерва продукции супероксид аниона были повышены на 25% у пациентов с недостаточностью митрального клапана по данным аХЛлн (p < 0,05).

Таблица 3

Сравнение показателей КЗМ нейтрофилов у пациентов, страдающих митральными пороками сердца

Показатель	Контроль (n=25)	Стеноз левого АВ-отверстия (n = 33)	Митральная недостаточность (n = 16)	p
Показатель	Контроль (n=25)	Стеноз левого АВ-отверстия (n = 33)	Митральная недостаточность (n = 16)	I-II	I-III	II-III
аХЛлл	1,1 (0,25; 2,75)	2,0 (1,1; 5,05)	4,6 (1,1; 6,5)	0,03	0,88	0,33
сХЛлн	0,7 (0,35; 1,3)	1,0 (0,81; 1,7)	1,0 (0,3; 1,8)	0,02	0,04	0,65
аХЛлн	0,75 (0,11; 0,1)	0,8 (0,1; 1,0)	1,0 (0,3; 1,1)	0,09	0,01	0,03
КАХЛлн	0,58 (0,22; 1,75)	0,33 (0,125; 1,0)	0,6 (0,33; 1,5)	0,8	0,47	0,04

Примечание: здесь и далее в таблицах значение показателей хемилюминесценции приведено в «10⁴ имп/мин», значение коэффициента активации в «ед.», хемолюминесцентный индекс в «%».

Вместе с этим, показатель метаболической активности продукции нейтрофилами супероксид аниона был статистически значимо повышен в обеих группах больных с РБС, по сравнению с группой контроля. (1,0 > 0,7 и 1,0 > 0,7; p < 0,05).

При сравнении групп пациентов установлено, что показатели метаболического резерва нейтрофилов были повышены у пациентов со стенозом левого АВ-отверстия, по сравнению с контролем на 81% (2,0 > 1,1; p < 0,05), в то время, как показатели, ответственные за резервные возможности производства супероксидного аниона, были повышены у пациентов с митральной недостаточностью, по сравнению с контролем на 33% (1,0> 0,75; p < 0,05).

Уровень продукции нейтрофилами супероксид аниона был статистически значимо повышен в обеих группах больных с РБС, по сравнению с контролем на 42% (p < 0,05). При межгрупповом сравнении пациентов были выявлены следующие статистически значимые различия: резерв продукции нейтрофилами супероксида у пациентов со стенозом левого АВ-отверстия был ниже, чем у пациентов, страдающих митральной недостаточностью.

Проводился анализ показателей КЗМ нейтрофилов у больных, страдающих хронической РБС с аортальными пороками сердца (Таблица 4).

Таблица 4

Сравнение показателей КЗМ нейтрофилов у пациентов с аортальными пороками сердца

Показатель	Контроль (n=25)	Аортальный стеноз (n = 13)	Аортальная недостаточность (n = 19)	p
Показатель	Контроль (n=25)	Аортальный стеноз (n = 13)	Аортальная недостаточность (n = 19)	I-II	I-III	II-III
сХЛлл	1,0(0,5;1,8)	2,0(1,1; 4,5)	1,5(1,0; 3,0)	0,02	0,76	0,44
аХЛлл	1,1(0,25; 2,75)	1,3(1,1; 5,5)	4,6(1,1; 6,5)	0,3	0,02	0,51
аХЛлн	0,75(0,1; 0,1)	0,6(0,1; 1,22)	1,0(0,3; 1,1)	0,1	0,01	0,59

У пациентов с ревматической болезнью сердца с аортальным стенозом окислительно-восстановительный потенциал нейтрофилов был повышен на 50% (p<0,05), а в группе пациентов с ревматической болезнью сердца с аортальной недостаточностью эти показатели были повышены более, чем в 4 раза (p < 0,05). Рост метаболического резерва нейтрофилов свидетельствует о повышении способности нейтрофилов отвечать на возможную дополнительную стимуляцию образованием окислительных факторов. При межгрупповом сравнении пациентов с аортальными пороками обе группы пациентов оказались идентичны, что свидетельствует о гомогенности кислородзависимых процессов.

Чтобы понять, насколько единообразны эти процессы в группах стенотических пороков сердца и в группах пороков с преобладанием недостаточности, эти группы сравнивались между собой. При сравнении показателей кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у пациентов со стенозом левого АВ-отверстия и у пациентов, страдающих стенозом аортального отверстия, никаких статистически значимых различий выявлено не было. При межгрупповом сравнении кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у пациентов с митральной недостаточностью, и у пациентов с недостаточностью аортального клапана сердца также никаких статистически значимых различий выявлено не было, что указывает на схожесть метаболических процессов, происходящих в нейтрофилах, у этих групп пациентов.

Все пациенты, с хронической РБС, осложненной сформировавшимся пороком сердца и хронической сердечной недостаточностью, были разделены на 4 группы, в зависимости от функционального класса ХСН (Таблица 5).

Таблица 5

Сравнение показателей метаболической активности нейтрофилов в зависимости от функционального класса сердечной недостаточности

Показатель	Контроль (n = 25)	ФК I (n = 18)	ФК II (n = 18)	ФК III (n = 26)	ФК IV (n = 17)
аХЛлл	1,1(0,25; 2,75)	1,7 (1,1; 5,5)*	1,75 (1,0; 3,7)**	1,5 (1,0; 4,7)	2,1 (1,5; 7,0)*
сХЛлн	0,7 (0,35; 1,3)	0,9 (0,4; 2,0)	1,04 (0,8; 1,8)*	1,1 (0,6; 2,6)*	1,0 (1,0; 1,3)
ХЛи, %	60,0 (35,7; 75,0)	54,7 (37,0;75,0)*	55,57 (35,4; 76,0)	69,25 (45,7; 84,0)***	63,2 (51,0; 71,0)

Примечание: * - p < 0,05 по сравнению с контролем; **p= 0,027, I-II; ***p=0,043, I-III.

При изучении особенностей кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у больных РПС, осложненными ХСН, на различных этапах ее развития было установлено, что при I ФК ХСН резервные возможности нейтрофилов были выше на 54.5% (p < 0,05), а у пациентов, имеющих IV ФК ХСН, резервные возможности нейтрофилов были выше на 90.9% (p < 0,05). Таким образом, у пациентов с IV ФК ХСН нейтрофилы активированы на 36.4% больше, чем у пациентов, имеющих I ФК ХСН.

У пациентов со II и III ФК ХСН статистически значимо были повышены показатели кислородзависимого метаболизма нейтрофилов, ответственные за продукцию супероксидного аниона: так, у пациентов, имеющих II ФК ХСН, продукция супероксидного аниона была на 48.6% выше, чем в контроле (p < 0,05). У пациентов, имеющих III ФК ХСН, этот показатель был на 57,1% выше, чем в контрольной группе (p < 0,05), а это на 8,5% больше, чем при II ФК ХСН.

При сравнительном анализе групп пациентов с ревматической болезнью сердца осложненной ХСН, оказалось, что у пациентов с ревматической болезнью сердца с ХСН первого ФК, степень метаболического резерва продукции супероксидного радикала была ниже на 3% (p =0,027), чем в группе пациентов с РБС осложненной ХСН второго ФК. В тоже время у пациентов с ревматической болезнью сердца, осложненной III ФК ХСН, потенциал системы антиоксидантной защиты плазмы крови был выше на 27%, чем у пациентов с первым ФК ХСН (p < 0,05).

Настоящее исследование показало увеличение антиоксидантного потенциала плазмы крови при нарастании ФК ХСН с тенденцией к нарастанию антиоксидантного потенциала плазмы от I до III ФК ХСН и снижению этого показателя к IV ФК ХСН. Это свидетельствует о напряженности компенсаторных возможностей антиоксидантного потенциала плазмы крови по мере нарастания функционального класса ХСН вплоть до III ФК и истощении его резерва при наступлении конечной стадии ХСН.

Все пациенты с РБС, вне зависимости от характера и локализации порока сердца, были условно разделены на три возрастные группы: группа пациентов моложе 30 лет, группа пациентов от 30 до 60 лет и группа пациентов старше 60 лет (таблица 6).

Таблица 6

Сравнение показателей функционального статуса нейтрофилов у больных РБС различных возрастных групп

Показатель	Контроль (n = 25)	Молодой возраст (n = 12)	Зрелый возраст (n = 38)	Пожилой возраст (n = 29)	р
Показатель	Контроль (n = 25)	Молодой возраст (n = 12)	Зрелый возраст (n = 38)	Пожилой возраст (n = 29)	I-II	II- IV	I-III	I-IV
сХЛлл, 10⁴, имп;мин	1,0 (0,5;1,8)	2,45 (1,15; 4,2)	1,35 (0,6; 4,1)	1,2 (0,7; 3,8)	0,03	0.78	0,84	0,64
аХЛлл, 10⁴, имп;мин	1,1 (0,25; 2,75)	3,35 (1,4; 5,7)	1,7 (1,1; 5,5)	1,5 (1,1; 4,7)	0,01	0,2	0,18	0,54
ХЛи, %	60,0 (35,7; 75,0)	51,0 (34,0; 67,0)	64,0 (41,9; 80,0)	70,0 (38,6; 84,9)	0,13	0,03	0,81	0,13

Установлено, что показатели резервных возможностей клеток были повышены на 204% (p < 0,05), а показатели метаболической активности нейтрофилов на 145% (p < 0,05) в группе молодого возраста, по сравнению с контрольной группой. Это дает основания предполагать большую выраженность иммунных реакций, опосредованных через нейтрофильные гранулоциты.

В группах среднего и старшего возраста данных, достигающих уровня статистической значимости, получено не было.

Все пациенты с РБС были разделены на две группы: с артериальной гипертензией и без артериальной гипертензии. Обе эти группы последовательно сравнивались с группой контроля. (Таблица 7).

Таблица 7

Сравнение показателей метаболической активности нейтрофилов в зависимости от наличия артериальной гипертензии

Показатель	Контроль (n=25)	Пациенты с РБС+АГ(n=46)	Пациенты с РБС без АГ (n=35)
аХЛлл	1,1 (0,25; 2,75)*	1,8 (1,1; 5,4)	2,5 (1,5; 4,7)*
аХЛлн	0,75 (0,11; 0,1)*	1,0 (0,1; 1,1)	2,12 (1,0; 2,22)*

Примечание: * - p < 0,05 по сравнению с контролем

Изучение показателей кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у больных с хронической РБС в зависимости наличия или отсутствия артериальной гипертензии продемонстрировало следующие закономерности: у пациентов с ревматической болезнью сердца, не страдающих артериальной гипертензией, отмечалось увеличение резерва продукции нейтрофилами гидроксильного анионрадикала, аниона гипохлорита и перекиси водорода на 127% (p < 0,05 по сравнению с контролем) и повышение резерва продукции супероксиданиона на 182% (p < 0,05 по сравнению с контролем). Это свидетельствуют об увеличении токсичности гранулоцитарных нейтрофилов в этой группе. В группе пациентов с ревматической болезнью сердца, с сопутствующей артериальной гипертензией также наблюдались аналогичные изменения, но они не получили уровня статистической значимости.

Настоящим исследованием установлены взаимосвязи между функциональным состоянием нейтрофилов и уровнем общего холестерина. (рисунок 1)

Blog

Окислительный стресс и дисфункция эндотелия у пациентов с ревматической болезнью сердца с хронической сердечной недостаточностью 14. 00. 39 ревматология